La selección de las donantes es el primer paso para la implementación de un programa de producción y
transferencia de embriones.
Además de la selección por mérito genético y productivo, es
recomendable hacer un estudio de función ovárica a través de ecografía y las donantes que presenten
un número muy bajo de folículos sean reemplazadas (en la medida del posible) por otras que tengan un
mayor potencial de recuperación.
Previo al arranque del programa de sincronización las receptoras son seleccionadas desarrollo
reproductivo, ciclicidad y condición corporal.
La sincronización se realiza desde un protocolo hormonal y tiene como objetivo empezar una nueva onda
folicular para todas las hembras que presenten celo en el mismo día. Los animales que coinciden con
el protocolo estarán habilitados para la transferencia de los embriones.
Donantes son aspiradas sin ninguna estimulación hormonal previa y en cualquier fase de ciclo estral.
Para donantes que van estar sometidas a un sistema de aspiración por un período prolongado de tiempo,
nuestra recomendación es respetar un intervalo de 3 semanas entre cada sesión de aspiración. En ese
sistema de aspiraciones cada 21 días se logran obtener ovocitos de mejor calidad y por lo tanto una
producción embrionaria un poco superior.
En un día de aspiración se pueden aspirar 30-35 donantes.
Los ovocitos recuperados de cada donante son madurados, fertilizados y cultivados en forma separada,
manteniendo así la identidad de cada donante durante todo el proceso. Con una única pajuela de semen
convencional se pueden inseminar ovocitos de 8-10 donantes, y en general una pajuela de semen sexado
es suficiente para fertilizar ovocitos de hasta 6 donantes. En el caso especial de rodeos de leche,
se pueden manejar las donantes en grupos, optimizando así el uso de cada pajuela de semen. Cuando
manejamos las donantes en grupos llegamos a inseminar hasta 200 ovocitos usando una sola pajuela de
semen sexado. De manera conservadora podríamos estimar que se podrían producir alrededor de 30
embriones con 1 sola pajuela.
Luego de la fertilización in vitro (FIV) los embriones son cultivados por 7 días en incubadoras con
temperatura y atmósfera controlada. Al final del período de cultivo, los embriones son seleccionados
y envasados para transferencia en fresco. El excedente puede ser vitrificado para la formación de un
banco de embriones al cliente, o directamente descartados.
En esta etapa, se realiza una nueva evaluación de las receptoras sincronizadas y, se transfieren los
embriones a aquellas receptoras que respondieron exitosamente al protocolo de sincronización.
Embriones producidos por fertilización in vitro (FIV) pueden ser congelados a través de dos técnicas:
A) Vitrificación: Por mucho tiempo la vitrificación fue el método estándar para la crio-preservación
de embriones bovinos producidos por FIV. Antes de la vitrificación, los embriones pasan por una
serie de medios de cultivo que protegerán sus estructuras celulares. Posteriormente se introducen
los embriones (individualmente, o en grupos de hasta 5 embriones) en finísimas pajuelas de
vitrificación perfectamente identificadas (comúnmente conocidas por OPS - del inglés Open Pulled
Straw), antes de que sean rápidamente sumergidos en nitrógeno líquido a -196ºC y guardados en el
banco de embriones.
La desvitrificación (proceso de recalentamiento de los embriones vitrificados) de estos embriones
debe ser realizada en laboratorio, por personal técnico capacitado, y luego de un período corto de
cultivo en incubadora, los mismos son seleccionados y envasados para transferencia a receptoras. Una
vez desvitrificados, los embriones no pueden volver a ser congelados. La tasa de preñez esperada con
embriones vitrificados está alrededor de los 35%-40%.
Ventajas de la Vitrificación:
Los embriones que sean vitrificados pueden ser cultivados con los mismos medios de cultivo
embrionario que aquellos embriones que van a ser transferidos en fresco, es decir que la
vitrificación es el método de elección para los casos que la cantidad de embriones exceda el número
de receptoras y exista por parte del cliente el interés en hacer un banco de embriones para
transferencias futuras.
Desventajas de la Vitrificación:
La vitrificación es una técnica que requiere desvitrificación en laboratorio por personal capacitado.
No es posible realizar la misma a campo.
B) Congelación Lenta por DT (transferencia directa):
La congelación lenta es una técnica muy difundida entre los veterinarios que se dedican al lavado
tradicional de embriones (MOET - Multiple Ovulation Embryo Transfer). La posibilidad de congelar
embriones producidos por FIV de manera similar a los embriones producidos in-vivo es una novedad, y
está disponible comercialmente hace poco tiempo.
Para que eso fuese posible, se desarrollaron nuevos medios para el cultivo embrionario y algunos
componentes tradicionales de los medios “standard” fueron sustituidos por componentes similares más
avanzados, específicos para que los embriones resistan exitosamente el proceso de congelación. La
congelación de cada embrión se hace de manera individual, en pajuelas de 0.25 cc debidamente
identificadas, respetando una curva de congelación lenta en congeladoras de embriones especialmente
desarrolladas para tal. El proceso de congelación de una tanda de embriones lleva alrededor de 1
hora, y luego los embriones son transferidos a nitrógeno líquido a -196º C y guardados en el banco
de embriones.
Las tasas de preñez esperada con embriones congelados por DT (transferencia directa), es similar a
los índices obtenidos con embriones vitrificados y está alrededor de los 30%-35%.
Ventajas de la Congelación por DT:
La gran ventaja de esa técnica es la posibilidad de transferencia directa de los embriones a campo.
Desventajas de la Congelación por DT:
Para que los embriones puedan ser congelados de manera lenta (DT) existe la necesidad de cultivarlos
en medios específicos para ese fin. Es decir que la decisión de que esos embriones sean congelados
(y no transferidos en fresco y/o vitrificados) tiene que ser tomada al inicio del trabajo. Existe
sí, la posibilidad de dedicar algunas donantes a congelación y otras a transferencia en fresco en
una misma tanda de OPU.
Las pajuelas pueden ser descongeladas a campo (10 segundos en el aire y 20 segundos sumergidos a 35º
C) y directamente transferidas a receptoras previamente sincronizadas. Además de la facilitar
inmensamente la transferencia, los embriones DT tienen gran potencial de comercialización entre
criadores que buscan diversificar su genética. Otra gran ventaja es la posibilidad de mantener las
donantes en un programa de aspiraciones periódicas durante todo el año y transferir los embriones en
primavera, donde existe mayor disponibilidad de receptoras.
